کیت تشخیص آلودگی مایکوپلاسما

از میان میکرو ارگانیسم‌های آلوده کننده فرآیندهای زیستی، مايكوپلاسما ها از اهمیت ویژه ای برخوردارند، زیرا در تمام مکان‌ها و حتی بدن کارکنان آزمایشگاه و وسایل حضور دارند و به راحتی نمونه‌های سلولی را آلوده می کنند. اما برخلاف باکتری‌ها و قارچ‌ها، حتي در آلودگي شديد هم علامت مشخصي در محيط كشت يا زير ميكروسكوپ ايجاد نمي‌كنند. بنابراين اغلب بدون استفاده از روش‌هاي مناسب، تشخیص آلودگي به مایکوپلاسما امکان پذیر نیست.

مايكوپلاسماها آثار فراواني بر روي عملكرد و خصوصيات سلولي نظير ميزان رشد و تكثير، قطعه قطعه شدن DNA، تغييرات كروموزومي، تغيير متابوليسم، تغيير پاسخ‌هاي ايمني، تغيير فعاليت ويروس‌ها در سلول‌هاي يوكاريوتي، تغيير غشاء سلولي، تغيير الگوي آنزيمي و…دارند. چنین تغييراتي نتايج آزمايش‌ها را غير قابل اطمينان و سلول‌ها را براي هر کاربردی غير قابل استفاده مي نمايد. به همین دلیل بررسی آلودگی به مایکوپلاسما به صورت دوره‌ای و مرتب توصیه شده است.

تهیه یک پروتکل روتین برای تشخیص عفونت های مایکوپلاسمایی، جهت به دست‌ آوردن نتایج تحقیقاتی قابل اعتماد، ضروری و انکارناپذیر است. به دلیل محدودیت در روش های معمول، این اواخر تکنولوژی‌هایی بر پایه اسید نوکلئیک خصوصاً روش‌های مبتنی بر واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) برای شناسایی و تشخیص تمامی گونه‌های جنس مایکوپلاسما، به عنوان روشی سریع و ویژه ارایه شده اند. هدف از تولید این کیت در شرکت پایش ژن ارائه روشی بر پایه PCR جهت آشکار کردن مایکوپلاسماها در نمونه های کشت سلولی و سایر فرآورده های بیولوژیک مانند واکسن‌ها بود.

اساس کیت تشخیصی مایکوپلاسما (MycoFind Detection Kit):

در کیت تشخیصی مایکوپلاسما، روش حساسی از touch down PCR) PCR) تهیه و جهت تشخیص جنس مایکوپلاسما در آلودگی‌های مرتبط با فرآورده‌های بیولوژیک توسعه داده شد. در این کیت ژن ۱۶ SrRNA به دلیل داشتن سکانس‌های مشترک و ثابت به عنوان ژن هدف، جهت تکثیر با پرایمرهای تغییر یافته مورد استفاده قرار گرفته است. این روش، با محصولی به اندازه ۴۳۸-۴۷۰ bp ، دارای حساسیتی در حد ۵  کپی از DNA ژنوم هدف بوده و با DNA بسیاری از میکروارگانیسم‌ها و رده‌های سلولی انسان واکنش متقاطعی ندارد. از این جهت، پرایمرها دارای حساسیت و ویژگی فوق العاده بالایی هستند.

کیت مایکوپلاسمای شرکت پایش ژن با نام تجاری MycoFind، شامل یک سیستم قابل اعتماد برای تخلیص و تشخیص گونه‌های مختلف مایکوپلاسما می‌باشد. DNA مایکوپلاسمای استخراج شده عاری از مهار کننده‌ها می‌باشد، به طوری که می‌تواند به عنوان الگو، مستقیماً در واکنش‌های PCR مورد استفاده قرار گیرد که این موضوع خود باعث صرفه جویی در هزینه و زمان می‌شود.